Cultura de tecidos
Cultura de tecidos , um método de pesquisa biológica em que fragmentos de tecido de um animal ou planta são transferidos para um meio Ambiente no qual eles podem continuar a sobreviver e funcionar. O culto tecido pode consistir em um único célula , uma população de células, ou a totalidade ou parte de um órgão. Células em cultura pode se multiplicar; alterar tamanho, forma ou função; exibir atividade especializada (células musculares, por exemplo, podem se contrair); ou interagir com outras células.
A cultura de tecidos geralmente requer condições de trabalho estéreis e, portanto, é normalmente realizada em uma cabine de fluxo laminar (ou capela de cultura de tecidos), que circula o ar filtrado para reduzir o risco de contaminação da cultura. Punctum / Assessoria de Imprensa e Informação do Governo Federal da Alemanha
Desenvolvimentos históricos
Uma das primeiras tentativas de cultura de tecidos foi feita em 1885 pelo zoólogo alemão Wilhelm Roux, que cultivado tecido de uma garota embrião em uma solução de sal quente. O primeiro sucesso real veio em 1907, no entanto, quando o zoólogo americano Ross G. Harrison demonstrou o crescimento de processos de células nervosas de sapo em um meio de linfa coagulada. O cirurgião francês Alexis Carrel e seu assistente Montrose Burrows posteriormente aprimoraram a técnica de Harrison, relatando seus avanços iniciais em uma série de artigos publicados em 1910-1911. Carrel e Burrows cunharam o termo cultura de tecido e definiu o conceito. Depois disso, vários experimentadores conseguiram cultivando células animais, usando como meio de cultura uma variedade de fluidos biológicos, como linfa, soro sanguíneo, plasma e extratos de tecidos. Nas décadas de 1980 e 1990, foram desenvolvidos métodos que permitiram aos pesquisadores cultivar com sucesso células-tronco embrionárias de mamíferos sob condições artificiais. Essas descobertas, em última análise, permitiram o estabelecimento e manutenção de linhas de células-tronco embrionárias humanas, que aumentaram a compreensão dos pesquisadores sobre a biologia humana e facilitado progresso na terapêutica e na medicina regenerativa.
Ambientes de cultura
As células podem ser cultivadas em um meio de cultura de origem biológica, como soro sanguíneo ou extrato de tecido, de forma quimicamente definida sintético médio, ou em uma mistura dos dois. Um meio deve conter proporções adequadas dos nutrientes necessários para as células a serem estudadas e deve ser apropriadamente ácido ou alcalino. Culturas são geralmente cultivadas como camadas únicas de células em uma superfície de vidro ou plástico ou como uma suspensão em um meio líquido ou semissólido.
Para iniciar uma cultura, uma pequena amostra do tecido é dispersa sobre ou no meio, e o frasco, tubo ou placa contendo a cultura é então incubado, geralmente a uma temperatura próxima à do ambiente normal do tecido. As condições estéreis são mantidas para evitar a contaminação com microorganismos. As culturas às vezes são iniciadas a partir de células únicas, resultando na produção de populações biológicas uniformes chamadas clones. Células individuais normalmente dão origem a colônias dentro de 10 a 14 dias após serem colocadas em condições de cultura.
Culturas primárias e linhas celulares estabelecidas
Existem dois tipos principais de culturas: culturas primárias (mortais) e culturas de linhas celulares estabelecidas (imortais). As culturas primárias consistem em células, tecidos ou órgãos normais que são excisados diretamente do tecido coletado por biópsia de um organismo vivo. As culturas primárias são vantajosas porque modelam essencialmente a função natural da célula, tecido ou órgão em estudo. No entanto, quanto mais tempo as amostras são mantidas em cultura, mais mutações elas se acumulam, o que pode levar a mudanças na estrutura cromossômica e na função celular. Além disso, as culturas primárias geralmente são mortais. As células passam por um processo de envelhecimento em que se multiplicam por apenas 50 a 100 gerações, após o que a taxa diminui acentuadamente. O ponto em que as células em culturas primárias param de crescer, ou passam por senescência replicativa, marca o chamado limite de Hayflick (batizado em homenagem a seu descobridor, o microbiologista americano Leonard Hayflick).
Em contraste, as linhas celulares estabelecidas podem ser perpetuadas indefinidamente. Essas linhas de células geralmente são derivadas de biópsias de tumor de pacientes ou podem ser geradas a partir de células primárias que sofreram mutações que lhes permitiram superar o limite de Hayflick e continuar a se replicar. Semelhante às células em culturas primárias, as células em linhas estabelecidas acumulam mutações ao longo do tempo que podem mudar suas características. Assim, para que pesquisadores de diferentes laboratórios possam comparar resultados de experimentos com as mesmas linhagens celulares, eles devem confirmar a identidade das células com as quais estão trabalhando. A identidade celular é verificada por meio de um processo conhecido como autenticação, no qual o perfil de DNA das células cultivadas é comparado ao perfil conhecido ou padrão dessa linhagem celular.
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